ოსტეოართრიტი (OA) ძვალ-სახსრების ერთ-ერთი გრძელვადიანი ქრონიკული დეგენერაციული დაავადებაა, რომელიც 65 წელს გადაცილებულ მოსახლეობას აწუხებს [1].
1]. როგორც წესი, OA პაციენტებს დიაგნოზირებულია დაზიანებული ხრტილით, ანთებითი სინოვიური გარსით და ეროზიული ქონდროციტებით, რაც იწვევს ტკივილს და ფიზიკურ დისტრესს [
2]. ართრიტის დროს ტკივილი ძირითადად გამოწვეულია სახსრებში ხრტილის ანთებით გამოწვეული დეგენერაციით, ხოლო როდესაც ხრტილი სერიოზულად ზიანდება, ძვლები შეიძლება ერთმანეთს შეეჯახონ, რაც აუტანელ ტკივილს და ფიზიკურ სირთულეებს იწვევს [
3]. კარგად არის დოკუმენტირებული ანთებითი მედიატორების მონაწილეობა ისეთ სიმპტომებში, როგორიცაა ტკივილი, შეშუპება და სახსრის შებოჭილობა. ოსტეოართრიტის მქონე პაციენტებში, ანთებითი ციტოკინები, რომლებიც იწვევენ ხრტილისა და სუბქონდრული ძვლის ეროზიას, გვხვდება სინოვიურ სითხეში [
4]. ოსტეოართრიტის მქონე პაციენტებს, როგორც წესი, ორი ძირითადი ჩივილი აქვთ ტკივილი და სინოვიალური ანთება. ამიტომ, ოსტეოართრიტის ამჟამინდელი თერაპიის ძირითადი მიზნები ტკივილისა და ანთების შემცირებაა. [
5] მიუხედავად იმისა, რომ OA-ს სამკურნალო საშუალებებმა, მათ შორის არასტეროიდულმა და სტეროიდულმა პრეპარატებმა, დაამტკიცა ეფექტურობა ტკივილისა და ანთების შემსუბუქებაში, ამ პრეპარატების ხანგრძლივ გამოყენებას სერიოზული შედეგები მოაქვს ჯანმრთელობისთვის, როგორიცაა გულ-სისხლძარღვთა, კუჭ-ნაწლავის და თირკმლის დისფუნქცია [
6] ამგვარად, ოსტეოართრიტის სამკურნალოდ უნდა შემუშავდეს უფრო ეფექტური მედიკამენტი ნაკლები გვერდითი მოვლენებით.
ბუნებრივი ჯანმრთელობის პროდუქტები სულ უფრო პოპულარული ხდება მათი უსაფრთხოებისა და მარტივად ხელმისაწვდომობის გამო [
7]. ტრადიციული კორეული მედიკამენტები დადასტურებულად ეფექტურია რამდენიმე ანთებითი დაავადების, მათ შორის ართრიტის წინააღმდეგ [
8]. Aucklandia lappa DC. ცნობილია თავისი სამკურნალო თვისებებით, როგორიცაა ცის ცირკულაციის გაძლიერება ტკივილის შესამსუბუქებლად და კუჭის დასამშვიდებლად და ტრადიციულად გამოიყენება, როგორც ბუნებრივი ტკივილგამაყუჩებელი [
9]. წინა ცნობები მიუთითებს, რომ A. lappa-ს აქვს ანთების საწინააღმდეგო მოქმედება [
10,
11], ტკივილგამაყუჩებელი [
12], კიბოს საწინააღმდეგო [
13] და გასტროპროტექტორული [
14] ეფექტები. A. lappa-ს სხვადასხვა ბიოლოგიური აქტივობა განპირობებულია მისი ძირითადი აქტიური ნაერთებით: კოსტუნოლიდი, დეჰიდროკოსტუს ლაქტონი, დიჰიდროკოსტუნოლიდი, კოსტუსლაქტონი, α-კოსტოლი, სოსურეას ლაქტონი და კოსტუსლაქტონი [
15] ადრე ჩატარებული კვლევები ამტკიცებენ, რომ კოსტუნოლიდს ანთების საწინააღმდეგო თვისებები ავლენდა ლიპოპოლისაქარიდში (LPS), რომელიც იწვევდა მაკროფაგების ინდუცირებას NF-kB-ის და სითბური შოკის ცილის გზის რეგულირების გზით [
16,
17] თუმცა, არცერთ კვლევაში არ შესწავლილა A. lappa-ს პოტენციური აქტივობა OA-ს სამკურნალოდ. ამჟამინდელ კვლევაში შესწავლილია A. lappa-ს თერაპიული ეფექტები OA-ს წინააღმდეგ (მონოსატრიუმ-იოდოაცეტატი) MIA-ს და ძმარმჟავას ინდუცირებული მღრღნელების მოდელების გამოყენებით.
მონოსოდიუმის იოდოაცეტატი (MIA) ცნობილია, როგორც ცხოველებში ტკივილის ქცევებისა და OA-ს პათოფიზიოლოგიური მახასიათებლების წარმოქმნისთვის [
18,
19,
20მუხლის სახსრებში შეყვანისას, MIA არღვევს ქონდროციტების მეტაბოლიზმს და იწვევს ანთებას და ანთების სიმპტომებს, როგორიცაა ხრტილისა და სუბქონდრული ძვლის ეროზია, რაც OA-ს ძირითადი სიმპტომებია [
18]. ძმარმჟავით გამოწვეული კრუნჩხვითი რეაქცია ფართოდ განიხილება, როგორც ცხოველებში პერიფერიული ტკივილის სიმულაცია, სადაც ანთებითი ტკივილის რაოდენობრივად გაზომვა შესაძლებელია [
19]. თაგვის მაკროფაგების უჯრედული ხაზი, RAW264.7, ფართოდ გამოიყენება ანთებაზე უჯრედული რეაქციების შესასწავლად. LPS-ით გააქტიურებისას, RAW264 მაკროფაგები ააქტიურებენ ანთებით გზებს და გამოყოფენ რამდენიმე ანთებით შუამავალს, როგორიცაა TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS და IL-6 [
20] ამ კვლევაში შეფასდა A. lappa-ს ანტინოციცეპტური და ანთების საწინააღმდეგო ეფექტები OA-ს წინააღმდეგ MIA ცხოველურ მოდელში, ძმარმჟავით ინდუცირებულ ცხოველურ მოდელში და LPS-აქტივირებულ RAW264.7 უჯრედებში.
2. მასალები და მეთოდები
2.1. მცენარეული მასალა
ექსპერიმენტში გამოყენებული A. lappa DC-ის გამხმარი ფესვი შეძენილი იყო Epulip Pharmaceutical Co., Ltd.-სგან (სეული, კორეა). იგი იდენტიფიცირებული იქნა გაჩონის უნივერსიტეტის კორეული მედიცინის პოლკოვნიკის, მცენარეული ფარმაკოლოგიის დეპარტამენტის პროფესორ დონჰუნ ლის მიერ, ხოლო ვაუჩერის ნიმუშის ნომერი იყო 18060301.
2.2. A. lappa ექსტრაქტის HPLC ანალიზი
A. lappa ექსტრაქცია განხორციელდა რეფლუქს აპარატის გამოყენებით (გამოხდილი წყალი, 3 საათი 100°C-ზე). ექსტრაგირებული ხსნარი გაფილტრული და კონდენსირებული იქნა დაბალი წნევის აორთქლების გამოყენებით. A. lappa ექსტრაქტს ჰქონდა 44.69% გამოსავლიანობა -80°C-ზე გაყინვით გაშრობის შემდეგ. A. lappa-ს ქრომატოგრაფიული ანალიზი ჩატარდა HPLC-ით, რომელიც დაკავშირებული იყო 1260 InfinityⅡ HPLC სისტემის გამოყენებით (Agilent, Pal Alto, CA, აშშ). ქრომატული გამოყოფისთვის გამოყენებული იქნა EclipseXDB C18 სვეტი (4.6 × 250 მმ, 5 µm, Agilent) 35°C-ზე. ნიმუშის სულ 100 მგ განზავდა 10 მლ 50%-იან მეთანოლში და დამუშავდა ულტრაბგერით 10 წუთის განმავლობაში. ნიმუშები გაფილტრული იქნა 0.45 μm შპრიცის ფილტრით (Waters Corp., Milford, MA, აშშ). მოძრავი ფაზის შემადგენლობა შედგებოდა 0.1% ფოსფორმჟავისგან (A) და აცეტონიტრილისგან (B) და სვეტი გამოიყო შემდეგნაირად: 0–60 წთ, 0%; 60–65 წთ, 100%; 65–67 წთ, 100%; 67–72 წთ, 0% გამხსნელი B 1.0 მლ/წთ ნაკადის სიჩქარით. გამონაბოლქვი დაკვირვება განხორციელდა 210 ნმ-ზე 10 μL ინექციის მოცულობის გამოყენებით. ანალიზი ჩატარდა სამჯერ.
2.3. ცხოველთა საცხოვრებელი და მართვა
5 კვირის ასაკის მამრი სპრეგ-დოულის (SD) ვირთხები და 6 კვირის ასაკის მამრი ICR თაგვები შეძენილი იქნა Samtako Bio Korea-სგან (გიონგი-დო, კორეა). ცხოველები იმყოფებოდნენ ოთახში მუდმივი ტემპერატურის (22 ± 2 °C) და ტენიანობის (55 ± 10%) და 12/12 საათიანი სინათლის/სიბნელის ციკლის გამოყენებით. ცხოველები ექსპერიმენტის დაწყებამდე ერთ კვირაზე მეტი ხნის განმავლობაში იყვნენ გაცნობილნი ამ მდგომარეობასთან. ცხოველებს ჰქონდათ საკვებისა და წყლის შეუზღუდავი მარაგი. გაჩონის უნივერსიტეტში ცხოველებზე მოვლისა და დამუშავების მოქმედი ეთიკური წესები (GIACUC-R2019003) მკაცრად იყო დაცული ცხოველებზე ჩატარებული ყველა ექსპერიმენტული პროცედურის დროს. კვლევა შემუშავებული იყო მკვლევარის მიერ ბრმა და პარალელური კვლევის სახით. ჩვენ გამოვიყენეთ ევთანაზიის მეთოდი ცხოველებზე ჩატარებული ექსპერიმენტული ეთიკის კომიტეტის მითითებების შესაბამისად.
2.4. MIA ინექცია და მკურნალობა
ვირთხები შემთხვევითობის პრინციპით დაიყვნენ 4 ჯგუფად: ფიქტიური, საკონტროლო, ინდომეტაცინი და A. lappa. 2%-იანი იზოფლუორანის O2 ნარევით ანესთეზირების შემდეგ, ვირთხებს მუხლის სახსრებში სახსარშიდად შეჰყავდათ 50 μL MIA (40 მგ/მ²; Sigma-Aldrich, სენტ-ლუისი, მისური, აშშ) ექსპერიმენტული OA-ს განვითარების მიზნით. მკურნალობა ჩატარდა შემდეგნაირად: საკონტროლო და ფიქტიური ჯგუფები იღებდნენ მხოლოდ AIN-93G საბაზისო დიეტას. მხოლოდ ინდომეტაცინის ჯგუფს მიეწოდა ინდომეტაცინი (3 მგ/კგ), რომელიც ინტეგრირებული იყო AIN-93G დიეტაში, ხოლო A. lappa 300 მგ/კგ ჯგუფს მიენიჭა AIN-93G დიეტა, რომელიც გამდიდრებული იყო A. lappa-თი (300 მგ/კგ). მკურნალობა გაგრძელდა OA ინდუქციის დღიდან 24 დღის განმავლობაში, 15-17 გ სხეულის წონის 190-210 გ-ზე ყოველდღიურად.
2.5. წონის ტარების გაზომვა
OA ინდუქციის შემდეგ, ვირთხების უკანა კიდურების წონის ტარების უნარის გაზომვა განრიგის მიხედვით ჩატარდა incapacitance-MeterTester600-ის (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, აშშ) გამოყენებით. უკანა კიდურებზე წონის განაწილება გამოითვალა: წონის ტარების უნარი (%).
