სუფთა საპოშნიკოვია დივარიკატას ზეთი სანთლისა და საპნის დასამზადებლად, საბითუმო დიფუზორის ეთერზეთი, ახალი ლერწმის სანთურის დიფუზორებისთვის

სუფთა Saposhnikovia divaricata ზეთი სანთლისა და საპნის დასამზადებლად საბითუმო დიფუზორის ეთერზეთი ახალი ლერწმის სანთურის დიფუზორებისთვის. რჩეული სურათი

მოკლე აღწერა:

2.1. SDE-ს მომზადება

SD-ს რიზომები შეძენილი იქნა გამხმარი ბალახეულის სახით Hanherb Co.-სგან (გური, კორეა). მცენარეული მასალები ტაქსონომიურად დაადასტურა კორეის აღმოსავლური მედიცინის ინსტიტუტის (KIOM) დოქტორმა გო-ია ჩოიმ. ვაუჩერის ნიმუში (ნომერი 2014 SDE-6) განთავსებული იქნა სტანდარტული მცენარეული რესურსების კორეულ ჰერბარიუმში. SD-ს გამხმარი რიზომები (320 გ) ორჯერ იქნა ექსტრაგირებული 70%-იანი ეთანოლით (2 საათიანი რეფლუქსით) და ექსტრაქტი შემდეგ კონცენტრირებული იქნა შემცირებული წნევის ქვეშ. ნაყენი გაფილტრული, ლიოფილიზებული და შენახული იქნა 4°C ტემპერატურაზე. ნედლი საწყისი მასალებიდან გამომშრალი ექსტრაქტის მოსავლიანობა იყო 48.13% (წონა/წონა).

2.2. რაოდენობრივი მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიის (HPLC) ანალიზი

ქრომატოგრაფიული ანალიზი ჩატარდა HPLC სისტემით (Waters Co., მილფორდი, მასაჩუსეტსი, აშშ) და ფოტოდიოდური მასივის დეტექტორით. SDE-ს HPLC ანალიზისთვის, პრაიმ-O-გლუკოზილციმიფუგინის სტანდარტი შეძენილი იქნა ტრადიციული მედიცინის ინდუსტრიის კორეის ხელშეწყობის ინსტიტუტისგან (გიონგსანი, კორეა) დაწმ-ო-გლუკოზილჰამაუდოლი და 4′-O-β-D-გლუკოზილ-5-Oმეთილვისამინოლი იზოლირებული იქნა ჩვენს ლაბორატორიაში და იდენტიფიცირებული იქნა სპექტრული ანალიზით, ძირითადად NMR და MS მეთოდებით.

SDE ნიმუშები (0.1 მგ) გახსნილი იქნა 70%-იან ეთანოლში (10 მლ). ქრომატოგრაფიული გამოყოფა ჩატარდა XSelect HSS T3 C18 სვეტით (4.6 × 250 მმ, 5μმ, Waters Co., მილფორდი, მასაჩუსეტსი, აშშ). მობილური ფაზა შედგებოდა აცეტონიტრილისგან (A) და 0.1% ძმარმჟავისგან წყალში (B) 1.0 მლ/წთ ნაკადის სიჩქარით. გამოყენებული იყო მრავალსაფეხურიანი გრადიენტის პროგრამა შემდეგნაირად: 5% A (0 წთ), 5–20% A (0–10 წთ), 20% A (10–23 წთ) და 20–65% A (23–40 წთ). აღმოჩენის ტალღის სიგრძე დასკანირებული იყო 210–400 ნმ-ზე და ჩაწერილი იყო 254 ნმ-ზე. ინექციის მოცულობა იყო 10.0μლ. სამი ქრომონის განსაზღვრის სტანდარტული ხსნარები მომზადდა 7.781 მგ/მლ საბოლოო კონცენტრაციით (პრიმ-O-გლუკოზილციმიფუგინი), 31.125 მგ/მლ (4′-O-β-D-გლუკოზილ-5-O-მეთილვისამინოლი), და 31.125 მგ/მლ (წმ-ო-გლუკოზილჰამაუდოლი) მეთანოლში და ინახება 4°C ტემპერატურაზე.

2.3. ანთების საწინააღმდეგო აქტივობის შეფასებაინ ვიტრო

2.3.1. უჯრედის კულტურა და ნიმუშის დამუშავება

RAW 264.7 უჯრედები მიღებული იქნა ამერიკული ტიპური კულტურების კოლექციიდან (ATCC, მანასასი, ვირჯინია, აშშ) და გაიზარდა DMEM გარემოში, რომელიც შეიცავდა 1%-იან ანტიბიოტიკებს და 5.5%-იან FBS-ს. უჯრედები ინკუბირებული იქნა 5%-იანი CO2-ის ნოტიო ატმოსფეროში 37°C ტემპერატურაზე. უჯრედების სტიმულირებისთვის, გარემო შეიცვალა ახალი DMEM გარემოთი და ლიპოპოლისაქარიდით (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., სენტ-ლუისი, მისური, აშშ) 1°C ტემპერატურაზე.μგ/მლ დაემატა SDE-ს (200 ან 400) არსებობისას ან არარსებობისასμგ/მლ) დამატებით 24 საათის განმავლობაში.

2.3.2. აზოტის ოქსიდის (NO), პროსტაგლანდინ E2-ის (PGE2) და სიმსივნის ნეკროზის ფაქტორის განსაზღვრაα(TNF-α), და ინტერლეიკინ-6-ის (IL-6) წარმოება

უჯრედები დამუშავდა SDE-თი და სტიმულირებული იქნა LPS-ით 24 საათის განმავლობაში. NO-ს წარმოება გაანალიზდა ნიტრიტის გაზომვით გრიესის რეაგენტის გამოყენებით, წინა კვლევის მიხედვით [12]. ანთებითი ციტოკინების PGE2, TNF-ის სეკრეციაα, ხოლო IL-6 განისაზღვრა ELISA ნაკრების გამოყენებით (R&D სისტემები) მწარმოებლის ინსტრუქციის შესაბამისად. SDE-ს გავლენა NO-სა და ციტოკინების წარმოებაზე განისაზღვრა 540 ნმ-ზე ან 450 ნმ-ზე Wallac EnVision-ის გამოყენებით.™მიკროფირფიტების წამკითხველი (PerkinElmer).

2.4. ოსტეოართრიტის საწინააღმდეგო აქტივობის შეფასებაინ ვივო

2.4.1. ცხოველები

მამრი სპრეგ-დოულის ვირთხები (7 კვირის) შეძენილი იქნა Samtako Inc.-ისგან (ოსანი, კორეა) და მოთავსებულნი იყვნენ კონტროლირებად პირობებში 12-საათიანი სინათლის/სიბნელის ციკლით.°C და% ტენიანობა. ვირთხებს ლაბორატორიული საკვები და წყალი მიეწოდათ.შეზღუდვაყველა ექსპერიმენტული პროცედურა ჩატარდა ჯანმრთელობის ეროვნული ინსტიტუტების (NIH) სახელმძღვანელო პრინციპების შესაბამისად და დამტკიცებული იყო დეჯონის უნივერსიტეტის (დეჯონი, კორეის რესპუბლიკა) ცხოველთა მოვლისა და გამოყენების კომიტეტის მიერ.

2.4.2. ვირთხებში OA-ს ინდუქცია MIA-თი

ცხოველები რანდომიზებულად შეირჩნენ და მკურნალობის ჯგუფებად დაიყო კვლევის დაწყებამდე (ჯგუფზე). MIA ხსნარი (3 მგ/50μ0.9%-იანი ფიზიოლოგიური ხსნარის 1 ლ (1 ლიტრი) პირდაპირ შეიყვანეს მარჯვენა მუხლის სახსარშიდა სივრცეში კეტამინისა და ქსილაზინის ნარევით გამოწვეული ანესთეზიის ქვეშ. ვირთხები შემთხვევითობის პრინციპით დაიყვნენ ოთხ ჯგუფად: (1) ფიზიოლოგიური ხსნარის ჯგუფი MIA ინექციის გარეშე, (2) MIA ჯგუფი MIA ინექციით, (3) SDE-თი დამუშავებული ჯგუფი (200 მგ/კგ) MIA ინექციით და (4) ინდომეტაცინის (IM-) დამუშავებული ჯგუფი (2 მგ/კგ) MIA ინექციით. ვირთხებს პერორალურად ეძლეოდათ SDE და IM MIA ინექციამდე 1 კვირით ადრე 4 კვირის განმავლობაში. ამ კვლევაში გამოყენებული SDE-ს და IM დოზირება ეფუძნებოდა წინა კვლევებში გამოყენებულ დოზებს [10,13,14].

2.4.3. უკანა თათის წონის განაწილების გაზომვები

OA ინდუქციის შემდეგ, უკანა თათების წონის ტარების უნარის თავდაპირველი ბალანსი დაირღვა. წონის ტარების ტოლერანტობის ცვლილებების შესაფასებლად გამოყენებული იქნა უუნარობის ტესტერი (Linton instrumentation, ნორფოლკი, დიდი ბრიტანეთი). ვირთხები ფრთხილად მოათავსეს საზომ კამერაში. უკანა კიდურის მიერ განხორციელებული წონის ტარების ძალა საშუალოდ გამოითვალა 3 წამიანი პერიოდის განმავლობაში. წონის განაწილების თანაფარდობა გამოითვალა შემდეგი განტოლებით: [წონა მარჯვენა უკანა კიდურზე/(წონა მარჯვენა უკანა კიდურზე + წონა მარცხენა უკანა კიდურზე)] × 100 [15].

2.4.4. შრატის ციტოკინების დონის გაზომვები

სისხლის ნიმუშები ცენტრიფუგირდა 1500 გ-ზე 10 წუთის განმავლობაში 4°C ტემპერატურაზე; შემდეგ შრატი შეგროვდა და გამოყენებამდე შეინახეს -70°C ტემპერატურაზე. IL-1-ის დონეებიβ, IL-6, TNF-αდა შრატში PGE2 გაიზომა R&D Systems-ის (მინეაპოლისი, მინესოტა, აშშ) ELISA კომპლექტების გამოყენებით, მწარმოებლის ინსტრუქციის შესაბამისად.

2.4.5. რეალურ დროში რაოდენობრივი RT-PCR ანალიზი

მუხლის სახსრის ქსოვილიდან მთლიანი რნმ ექსტრაგირებული იქნა TRI რეაგენტი®-ის (Sigma-Aldrich, სენტ-ლუისი, მისური, აშშ) გამოყენებით, უკუტრანსკრიფციული იქნა cDNA-დ და PCR-გამრავლებული იქნა TM One Step RT PCR ნაკრების გამოყენებით SYBR მწვანეთი (Applied Biosystems, გრანდ აილენდი, ნიუ-იორკი, აშშ). რეალურ დროში რაოდენობრივი PCR ჩატარდა Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR სისტემის (Applied Biosystems, გრანდ აილენდი, ნიუ-იორკი, აშშ) გამოყენებით. პრაიმერის თანმიმდევრობები და ზონდის თანმიმდევრობა ნაჩვენებია ცხრილში.1ნიმუშის cDNA-ების ალიკვოტები და GAPDH cDNA-ს თანაბარი რაოდენობა ამპლიფიცირებული იქნა TaqMan® Universal PCR მასტერ ნარევით, რომელიც შეიცავდა დნმ პოლიმერაზას, მწარმოებლის ინსტრუქციის შესაბამისად (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR პირობები იყო 2 წუთი 50°C-ზე, 10 წუთი 94°C-ზე, 15 წამი 95°C-ზე და 1 წუთი 60°C-ზე 40 ციკლის განმავლობაში. სამიზნე გენის კონცენტრაცია განისაზღვრა შედარებითი Ct (ზღურბლის ციკლის ნომერი ამპლიფიკაციის დიაგრამასა და ზღურბლს შორის გადაკვეთის წერტილში) მეთოდით, მწარმოებლის ინსტრუქციის შესაბამისად.

FOB ფასი:0.5 აშშ დოლარი - 9,999 / ცალი

მინ. შეკვეთის რაოდენობა:100 ცალი/ცალი

მიწოდების შესაძლებლობა:10000 ცალი/ცალი თვეში

გამოგვიგზავნეთ ელ.წერილი

პროდუქტის დეტალები

პროდუქტის ტეგები

ოსტეოართრიტი (OA) ხანდაზმულებში კუნთოვანი სისტემის ყველაზე გავრცელებული დაავადება და სახსრების ყველაზე გავრცელებული დეგენერაციული დაავადებაა [1]. OA არის მდგომარეობა, რომელიც ნაწილობრივ გამოწვეულია დაზიანებით, ხრტილის სტრუქტურისა და ფუნქციის დაკარგვით და პროანთებითი და ანთების საწინააღმდეგო გზების დისრეგულაციით [2,3]. ის ძირითადად აზიანებს სინოვიალური სახსრების სასახსრე ხრტილსა და სუბქონდრულ ძვალს და იწვევს სახსრების უკმარისობას, რაც იწვევს ტკივილს წონის აწევის დროს, მათ შორის სიარულისა და დგომის დროს [4].

OA-ს განკურნება არ არსებობს, რადგან ხრტილის აღდგენა მისი განადგურების შემდეგ ძალიან რთულია [5] მკურნალობის მიზნებია ტკივილის შემსუბუქება, სახსრების მობილობის შენარჩუნება ან გაუმჯობესება, სახსრების სიმტკიცის გაზრდა და დაავადების ინვალიდობის ეფექტების მინიმიზაცია. ოსტეოართრიტის ფარმაკოლოგიური მკურნალობა მიზნად ისახავს ტკივილის შემცირებას, რათა გაიზარდოს პაციენტის სახსრების ფუნქცია და ცხოვრების ხარისხი. მიუხედავად იმისა, რომ ხრტილის განადგურება ოსტეოართრიტის მთავარი მოვლენაა, კოლაგენის დეგრადაცია ფუნდამენტური ინციდენტია, რომელიც განსაზღვრავს ოსტეოართრიტის შეუქცევად პროგრესირებას ანთებასთან ერთად [6,7]. მოსალოდნელია, რომ ანთების საწინააღმდეგო და ქონდროპროტექტორული აქტივობის მქონე მკურნალობა შეამსუბუქებს ტკივილს და შეინარჩუნებს მატრიქსის მთლიანობას OA პაციენტებში.

ამგვარად, ანთების შემცირება, სავარაუდოდ, სასარგებლო იქნება OA-ს მართვაში. ბოლოდროინდელი კვლევები მიუთითებს მცენარეული რესურსების დამცავ როლზე OA-ს პროგრესირებაზე, ქონდროციტების ანთების შემცირებისა და ხრტილის შემდგომი განადგურების თვალსაზრისით, მათი უნარის მეშვეობით, ურთიერთქმედება მოახდინონ სახსრებთან დაკავშირებულ ქსოვილებთან, რაც იწვევს სახსრების ტკივილის შემსუბუქებას [8].

ფესვისაპოშნიკოვია დივარიკატასქიშკინი (Umbelliferae) ფართოდ გამოიყენება ტრადიციულ მედიცინაში თავის ტკივილის, ტკივილის, ანთების და ართრიტის სამკურნალოდ კორეასა და ჩინეთში [9,10]. მრავალფეროვანი ფარმაკოლოგიური ეფექტებისაპოშნიკოვია დივარიკატა(SD) ასევე მოიცავს ანთების საწინააღმდეგო, ტკივილგამაყუჩებელ, სიცხის დამწევ და ანტიართრიტულ თვისებებს [9,11]. ბოლოდროინდელმა კვლევამ აჩვენა, რომ SD ქრომონის ექსტრაქტს გააჩნია პოტენციური ანტირევმატოიდული ართრიტის ეფექტები კოლაგენით გამოწვეული ართრიტის თაგვის მოდელში [10]; თუმცა, ჩატარდა რამდენიმე კვლევა, რომელიც ადასტურებდა ანთების საწინააღმდეგო და ანტიართრიტის აქტივობასსაპოშნიკოვია დივარიკატაექსტრაქტი (SDE).

ამიტომ, ამ კვლევაში გამოიკვლია SD-ს 70%-იანი ეთანოლის ექსტრაქტის ანთების საწინააღმდეგო და ოსტეოართრიტის საწინააღმდეგო აქტივობა. პირველ რიგში, შეფასდა SDE-ს ანთების საწინააღმდეგო ეფექტი.ინ ვიტროLPS-ით ინდუცირებულ RAW 264.7 უჯრედებში. შემდეგ, SDE-ს ანტიოსტეოართრიტული ეფექტი გაიზომა მონოსოდიუმის იოდოცეტატით (MIA-) ინდუცირებული OA-ს ვირთხის მოდელში წონის ტარების განაწილების, სასახსრე ხრტილის დეგრადაციის და ანთებითი რეაქციების შეფასებით.