სუფთა Saposhnikovia divaricata ზეთი სანთლებისთვის და საპნის დასამზადებლად საბითუმო დიფუზორული ეთერზეთი ახალი ლერწმის დამწვრობის დიფუზორებისთვის

მოკლე აღწერა:

2.1. SDE-ს მომზადება

SD-ს რიზომები შეძენილია გამხმარი ბალახის სახით Hanherb Co.-დან (გური, კორეა). მცენარეული მასალები ტაქსონომიურად დადასტურდა კორეის აღმოსავლური მედიცინის ინსტიტუტის (KIOM) დოქტორი გო-ია ჩოის მიერ. ვაუჩერის ნიმუში (ნომერი 2014 SDE-6) დეპონირებული იყო სტანდარტული მცენარეული რესურსების კორეის ჰერბარიუმში. SD-ის გამხმარი რიზომები (320 გ) ორჯერ იქნა მოპოვებული 70% ეთანოლით (2 სთ რეფლუქსით) და ექსტრაქტი კონცენტრირებული იყო შემცირებული წნევის ქვეშ. დეკორქცია გაფილტრული იყო, ლიოფილიზებული და ინახება 4°C-ზე. გამომშრალი ექსტრაქტის გამოსავლიანობა ნედლი საწყისი მასალებიდან იყო 48,13% (w/w).

2.2. რაოდენობრივი მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიის (HPLC) ანალიზი

ქრომატოგრაფიული ანალიზი ჩატარდა HPLC სისტემით (Waters Co., Milford, MA, USA) და ფოტოდიოდური მასივის დეტექტორით. SDE-ს HPLC ანალიზისთვის, პრიმ-O-გლუკოზილციმიფუგინის სტანდარტი შეძენილია ტრადიციული მედიცინის ინდუსტრიის კორეის პრომოუშენის ინსტიტუტიდან (გიონგსანი, კორეა) დაწამი-O-გლუკოზილჰამუდოლი და 4'-O-β-D-გლუკოზილ-5-O-მეთილვიზამინოლი იზოლირებული იყო ჩვენს ლაბორატორიაში და იდენტიფიცირებული იყო სპექტრალური ანალიზით, ძირითადად NMR-ით და MS-ით.

SDE ნიმუშები (0.1 მგ) იხსნება 70% ეთანოლში (10 მლ). ქრომატოგრაფიული გამოყოფა განხორციელდა XSelect HSS T3 C18 სვეტით (4.6 × 250 მმ, 5μმ, Waters Co., Milford, MA, USA). მობილური ფაზა შედგებოდა აცეტონიტრილის (A) და 0.1% ძმარმჟავას წყალში (B) ნაკადის სიჩქარით 1.0 მლ/წთ. მრავალსაფეხურიანი გრადიენტური პროგრამა გამოიყენებოდა შემდეგნაირად: 5% A (0 წთ), 5–20% A (0–10 წთ), 20% A (10–23 წთ) და 20–65% A (23–40 წთ. ). გამოვლენის ტალღის სიგრძე სკანირებული იყო 210-400 ნმ-ზე და ჩაიწერა 254 ნმ-ზე. ინექციის მოცულობა იყო 10.0μL. სტანდარტული ხსნარები სამი ქრომონის დასადგენად მომზადდა საბოლოო კონცენტრაციით 7,781 მგ/მლ (პრიმ-O-გლუკოზილციმიფუგინი), 31,125 მგ/მლ (4′-O-β-D-გლუკოზილ-5-O-მეთილვიზამინოლი) და 31.125 მგ/მლ (წამი-O-გლუკოზილჰამუდოლი) მეთანოლში და ინახება 4°C-ზე.

2.3. ანთების საწინააღმდეგო აქტივობის შეფასებაინ ვიტრო

2.3.1. უჯრედების კულტურა და ნიმუშების მკურნალობა

RAW 264.7 უჯრედები მიღებულ იქნა ამერიკული ტიპის კულტურის კოლექციიდან (ATCC, Manassas, VA, აშშ) და გაიზარდა DMEM გარემოში, რომელიც შეიცავს 1% ანტიბიოტიკებს და 5.5% FBS. უჯრედები ინკუბირებული იყო დატენიანებულ ატმოსფეროში 5% CO2-ით 37°C-ზე. უჯრედების სტიმულირებისთვის, გარემო შეიცვალა ახალი DMEM საშუალებით და ლიპოპოლისაქარიდით (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 1-ზე.μგ/მლ დაემატა SDE-ს თანდასწრებით ან არარსებობით (200 ან 400μგ/მლ) დამატებით 24 სთ.

2.3.2. აზოტის ოქსიდის (NO), პროსტაგლანდინის E2 (PGE2) განსაზღვრა, სიმსივნის ნეკროზის ფაქტორი-α(TNF-α), და ინტერლეუკინ-6 (IL-6) წარმოება

უჯრედები დამუშავდა SDE-ით და სტიმულირებული იყო LPS-ით 24 საათის განმავლობაში. NO-ს წარმოება გაანალიზდა ნიტრიტების გაზომვით Griess-ის რეაგენტის გამოყენებით, წინა კვლევის მიხედვით [12]. ანთებითი ციტოკინების სეკრეცია PGE2, TNF-αდა IL-6 განისაზღვრა ELISA ნაკრების (R&D სისტემები) გამოყენებით მწარმოებლის ინსტრუქციის მიხედვით. SDE-ს ეფექტი NO-ზე და ციტოკინის წარმოებაზე განისაზღვრა 540 ნმ ან 450 ნმ-ზე Wallac EnVision-ის გამოყენებით™მიკროპლატის წამკითხველი (PerkinElmer).

2.4. ანტიოსტეოართრიტის აქტივობის შეფასებაIn Vivo

2.4.1. ცხოველები

მამრი Sprague-Dawley ვირთხები (7 კვირის) შეძენილი იყო Samtako Inc.-დან (ოსანი, კორეა) და დაბინავებული იყო კონტროლირებად პირობებში 12-საათიანი სინათლის/სიბნელის ციკლით°C და% ტენიანობა. ვირთხებს მიეცათ ლაბორატორიული დიეტა და წყალიad libitum. ყველა ექსპერიმენტული პროცედურა ჩატარდა ჯანდაცვის ეროვნული ინსტიტუტის (NIH) მითითებების შესაბამისად და დამტკიცებული იყო დეჯონის უნივერსიტეტის ცხოველთა მოვლისა და გამოყენების კომიტეტის მიერ (დაეჯონი, კორეის რესპუბლიკა).

2.4.2. OA-ს ინდუქცია შსს-ით ვირთხებში

ცხოველები იყო რანდომიზირებული და მინიჭებული იქნა მკურნალობის ჯგუფებში კვლევის დაწყებამდე (ჯგუფში). შსს ხსნარი (3 მგ/50μლ 0,9% ფიზიოლოგიური ხსნარი) პირდაპირ შეჰყავდათ მარჯვენა მუხლის სახსარშიდა სივრცეში ანესთეზიის ქვეშ, რომელიც გამოწვეული იყო კეტამინისა და ქსილაზინის ნარევით. ვირთხები შემთხვევით დაყვეს ოთხ ჯგუფად: (1) ფიზიოლოგიური ხსნარის ჯგუფი MIA ინექციით, (2) MIA ჯგუფი MIA ინექციით, (3) SDE-ზე დამუშავებული ჯგუფი (200 მგ/კგ) MIA ინექციით და (4 ) ინდომეტაცინით (IM-) დამუშავებული ჯგუფი (2 მგ/კგ) შსს ინექციით. ვირთხებს შეჰყავდათ პერორალურად SDE და IM 1 კვირით ადრე შსს ინექციამდე 4 კვირის განმავლობაში. ამ კვლევაში გამოყენებული SDE და IM დოზა დაფუძნებული იყო წინა კვლევებში გამოყენებულ დოზებზე [10,13,14].

2.4.3. Hindpaw წონის ტარების განაწილების გაზომვები

OA ინდუქციის შემდეგ, თავდაპირველი ბალანსი უკანა თათების წონის ტარების უნარში დაირღვა. ქმედუუნარობის ტესტერი (Linton instrumentation, Norfolk, UK) გამოყენებული იყო წონის ტარების ტოლერანტობის ცვლილებების შესაფასებლად. ვირთხები ფრთხილად მოათავსეს საზომ კამერაში. უკანა კიდურის მიერ განხორციელებული წონის მატარებელი ძალა იყო საშუალოდ 3 წამის განმავლობაში. წონის განაწილების თანაფარდობა გამოითვალა შემდეგი განტოლებით: [წონა მარჯვენა უკანა კიდურზე/(წონა მარჯვენა უკანა კიდურზე + წონა მარცხენა უკანა კიდურზე)] × 100 [15].

2.4.4. შრატში ციტოკინის დონის გაზომვები

სისხლის ნიმუშები ცენტრიფუგირებულ იქნა 1500 გ-ზე 10 წუთის განმავლობაში 4°C-ზე; შემდეგ შრატი შეგროვდა და ინახებოდა -70°C-ზე გამოყენებამდე. IL-1-ის დონეებიβ, IL-6, TNF-αდა შრატში PGE2 გაზომეს ELISA კომპლექტების გამოყენებით R&D Systems-ისგან (Minneapolis, MN, აშშ) მწარმოებლის ინსტრუქციის მიხედვით.

2.4.5. რეალურ დროში რაოდენობრივი RT-PCR ანალიზი

მთლიანი რნმ ამოღებულ იქნა მუხლის სახსრის ქსოვილიდან TRI რეაგენტის® გამოყენებით (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, აშშ), უკან გადაიწერება cDNA-ში და PCR გაძლიერდა TM One Step RT PCR ნაკრების გამოყენებით SYBR მწვანეთი (Applied Biosystems გრანდ აილენდი, NY, აშშ). რეალურ დროში რაოდენობრივი PCR ჩატარდა Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR სისტემის გამოყენებით (Applied Biosystems, Grand Island, NY, აშშ). პრაიმერის თანმიმდევრობა და ზონდი-მიმდევრობა ნაჩვენებია ცხრილში1. ნიმუშების cDNA-ების ალიქვოტები და GAPDH cDNA-ის თანაბარი რაოდენობა გაძლიერდა TaqMan® Universal PCR მასტერ ნარევით, რომელიც შეიცავს დნმ პოლიმერაზას მწარმოებლის ინსტრუქციის მიხედვით (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR პირობები იყო 2 წუთი 50°C-ზე, 10 წუთი 94°C-ზე, 15 წამი 95°C-ზე და 1 წუთი 60°C-ზე 40 ციკლისთვის. სამიზნე გენის კონცენტრაცია განისაზღვრა შედარებითი Ct (ზღვრული ციკლის რიცხვი ჯვარედინი წერტილზე ამპლიფიკაციის ნახაზსა და ზღურბლს შორის) მეთოდით, მწარმოებლის ინსტრუქციის მიხედვით.

FOB ფასი:0,5 აშშ დოლარი - 9,999 აშშ დოლარი / ცალი

მინ. შეკვეთის რაოდენობა:100 ცალი/ცალი

მიწოდების უნარი:10000 ცალი/ცალი თვეში

გამოგვიგზავნეთ ელ.წერილი

პროდუქტის დეტალი

პროდუქტის ტეგები

ოსტეოართრიტი (OA) არის ყველაზე ხშირი კუნთოვანი აშლილობა და ყველაზე გავრცელებული დეგენერაციული სახსრების დაავადება ხანდაზმულებში.1]. OA არის მდგომარეობა, რომელიც გამოწვეულია ნაწილობრივ დაზიანებით, ხრტილის სტრუქტურისა და ფუნქციის დაკარგვით და პროანთებითი და ანთების საწინააღმდეგო გზების დისრეგულირებით.2,3]. ის უპირველეს ყოვლისა აზიანებს სასახსრე ხრტილსა და სინოვიალური სახსრების სუბქონდრალურ ძვალს და იწვევს სახსრების უკმარისობას, რაც იწვევს ტკივილს წონის ტარებისას, სიარულისა და დგომის ჩათვლით.4].

OA-ს განკურნება არ არსებობს, რადგან მისი განადგურების შემდეგ ხრტილის აღდგენა ძალიან რთულია [5]. მკურნალობის მიზანია ტკივილის შემსუბუქება, სახსრების მობილობის შენარჩუნება ან გაუმჯობესება, სახსრების სიმტკიცის გაზრდა და დაავადების გამომწვევი ეფექტის მინიმუმამდე შემცირება. OA-ს ფარმაკოლოგიური მკურნალობა მიზნად ისახავს ტკივილის შემცირებას, რათა გაზარდოს პაციენტის ერთობლივი ფუნქცია და ცხოვრების ხარისხი. მიუხედავად იმისა, რომ ხრტილის დესტრუქცია არის OA-ს მთავარი მოვლენა, კოლაგენის დეგრადაცია არის ფუნდამენტური ინციდენტი, რომელიც განსაზღვრავს OA-ს შეუქცევად პროგრესირებას ანთებასთან ერთად.6,7]. მოსალოდნელია, რომ ანთების საწინააღმდეგო და ქონდროპროტექტორული აქტივობით მკურნალობა შეამსუბუქებს ტკივილს და შეინარჩუნებს მატრიქსის მთლიანობას OA პაციენტებში.

ამიტომ, ანთების შემცირება სავარაუდოდ სასარგებლო იქნება OA მენეჯმენტში. ბოლო კვლევები ვარაუდობენ მცენარეული რესურსების დამცავ როლს OA-ს პროგრესირებაზე, ქონდროციტების ანთების და ხრტილების შემდგომი განადგურების თვალსაზრისით, სახსრებთან დაკავშირებულ ქსოვილებთან ურთიერთქმედების უნარის მეშვეობით, რაც იწვევს სახსრების ტკივილის შერბილებას.8].

ფესვისაპოშნიკოვია დივარიკატაშიშკინი (Umbelliferae) ფართოდ გამოიყენება ტრადიციულ მედიცინაში თავის ტკივილის, ტკივილის, ანთების და ართრიტის სამკურნალოდ კორეასა და ჩინეთში.9,10]. მრავალფეროვანი ფარმაკოლოგიური ეფექტისაპოშნიკოვია დივარიკატა(SD) ასევე შეიცავს ანთების საწინააღმდეგო, ტკივილგამაყუჩებელ, სიცხის დამწევ და ანტიართრიტურ თვისებებს [9,11]. ბოლო კვლევამ აჩვენა, რომ SD ქრომონის ექსტრაქტს გააჩნია პოტენციური ანტირევმატოიდული ართრიტის ეფექტები კოლაგენით გამოწვეული ართრიტის თაგვის მოდელში [10]; თუმცა, რამდენიმე კვლევა ჩატარდა ანთების საწინააღმდეგო და ანტიართრიტის აქტივობის მხარდასაჭერადსაპოშნიკოვია დივარიკატაამონაწერი (SDE).

ამიტომ, წინამდებარე კვლევამ გამოიკვლია SD-ს 70% ეთანოლის ექსტრაქტის ანთების საწინააღმდეგო და ანტიოსტეოართრიტის მოქმედება. პირველ რიგში, შეფასდა SDE-ს ანთების საწინააღმდეგო ეფექტიინ ვიტროLPS-ით გამოწვეული RAW 264.7 უჯრედებში. შემდეგ, SDE-ს ანტიოსტეოართრიტის ეფექტი გაზომილი იყო წონის მატარებელი განაწილების, სასახსრე ხრტილის დეგრადაციის და ანთებითი რეაქციების შეფასებით მონოსტრიუმის იოდოაცეტატით (MIA-) ინდუცირებული OA-ს ვირთხების მოდელში.